Apakah ujian darah untuk ELISA

Perkembangan perubatan moden dalam dunia diagnostik tidak pernah berhenti mengagumkan dengan pencapaiannya, dan sekarang doktor tidak perlu membuat andaian mengenai kemungkinan diagnosis, hanya bergantung pada tanda-tanda tidak langsung. Penciptaan dan pengenalan ke dalam dunia penyelidikan makmal pengujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim (ELISA) membolehkan anda menentukan dengan cepat dan tepat bukan sahaja kehadiran patogen, tetapi juga banyak ciri lain penyakit ini.

Sejarah penciptaan dan pengembangan IFA

Kaedah ujian darah ini mula digunakan dalam perubatan praktikal pada pertengahan abad yang lalu - di suatu tempat pada tahun 60-an. Tujuan awalnya adalah penyelidikan ilmiah dalam bidang histologi, yang hanya terbatas pada pencarian dan kajian struktur antigenik selular spesies biologi. Ujian darah dengan kaedah ELISA didasarkan pada interaksi antigen terkait (AG) dan antibodi spesifik (AT), dengan pembentukan kompleks "antigen-antibodi", ditentukan oleh enzim.

Fenomena ini mendorong para saintis untuk memutuskan bahawa kaedah itu dapat digunakan untuk mengenali sebatian protein dari pelbagai kelas yang terbentuk dalam serum darah ketika patogen memasuki tubuh. Oleh kerana penglibatan mereka secara langsung dalam fungsi sistem kekebalan tubuh, sebatian ini disebut imunoglobulin (Ig, Ig), dan penemuan ini merupakan penembusan terbesar dalam diagnostik makmal..

Pada masa yang sama, kaedah yang sangat sensitif ini mula digunakan secara aktif hanya pada tahun 80-an, dan hanya boleh didapati di institusi perubatan yang sangat khusus. Yang pertama dapat menggunakan penganalisis immunoassay enzim di stesen dan pusat pemindahan darah, institusi perubatan venereal dan berjangkit. Ini disebabkan oleh penyebaran "wabak abad ke-20" yang cepat - AIDS, dan tindakan diagnostik dan terapi segera diperlukan..

Kemungkinan teknik

Bidang aplikasi ujian darah untuk ELISA cukup luas - pada masa ini mustahil untuk membayangkan betapa rumitnya pencarian penyebab banyak penyakit. Penyelidikan seperti ini kini digunakan di hampir semua bidang perubatan, bahkan dalam bidang onkologi. Walaupun sulit untuk dimengerti yang tidak berpengetahuan, dalam beberapa kasus, setelah melakukannya, adalah mungkin untuk menyelamatkan nyawa pesakit, setelah menemukan tumor pada tahap awal..

Di pusat diagnostik moden, pemeriksaan makmal tidak hanya ditunjukkan oleh penanda tumor - mereka juga dilengkapi dengan panel panel yang mengagumkan untuk menjalankan diagnosis ini. Dengan pertolongan mereka, banyak keadaan patologi dapat ditentukan, seperti kelainan hormon dan proses berjangkit dari pelbagai asal..

Di samping itu, melakukan dan menyahkod ujian darah ELISA akan memungkinkan untuk mengesan kesan ubat-ubatan pada tubuh orang yang sakit dan juga haiwan. Yang terakhir digunakan secara meluas di klinik veterinar, membantu menjaga kesihatan haiwan peliharaan atau pencari nafkah kita, menyediakan bekalan daging, produk tenusu dan telur yang tidak tergantikan dalam diet..

Oleh itu, akibat mengambil hanya beberapa mililiter darah vena dan diagnosisnya menggunakan kaedah ELISA, doktor, setelah menerangkan bahan penyelidikan, dapat menentukan:

  • keadaan hormon, termasuk bahan aktif biologi gonad dan kelenjar tiroid, serta kelenjar adrenal;
  • kehadiran jangkitan bakteria dan virus (hepatitis B dan C, sifilis, herpes, klamidia, tuberkulosis, myco- dan ureaplasmosis, HIV, TORCH) dan penyakit lain seperti ini;
  • tanda-tanda aktiviti penting patogen proses patologi, yang berakhir dalam pemulihan dan melewati tahap pembentukan antibodi (tindak balas imun).

Kompleks semacam itu jauh lebih mudah dikenali dan dihilangkan oleh sel-sel imun. Kesan sisa dalam bentuk antibodi dalam banyak kes terkandung dalam darah seumur hidup, yang secara praktikal mengurangkan risiko jangkitan semula menjadi sifar.

Varieti imunoglobulin

Terdapat beberapa jenis antibodi, dan masing-masing terlibat dalam proses tindak balas imun pada tahap tertentu. Sebagai contoh, imunoglobulin kelas M (IgM) adalah yang pertama terbentuk sebagai tindak balas kepada kemasukan hipertensi ke dalam badan. Kadar tertinggi mereka diperhatikan pada hari-hari pertama penyakit ini..

Kemudian sistem imun melancarkan kelas G Ig (IgG) ke dalam plasma, yang bertanggungjawab untuk pemusnahan antigen sepenuhnya dan pemulihan pesakit. Kemudian, mereka terus berada di dalam darah, dengan itu menyediakan kekebalan untuk serangan berulang patogen yang sama. Inilah cara kerja vaksinasi. Dengan pengenalan antigen mikroorganisma patologi yang lemah, banyak imunoglobulin muncul dan tetap beredar di plasma.

Dan, seterusnya, jika berlaku kontak patogen, mereka dapat mengatasi jangkitan dengan cepat, menyelamatkan tubuh dari ancaman kesihatan. IgA tertumpu dalam jumlah besar pada selaput lendir, menyekat kemasukan virus dan bakteria patogen ke dalam badan. IgE bertanggungjawab untuk membunuh jangkitan parasit, dan terdapat banyak imunoglobulin lain yang terlibat dalam tindak balas imun.

Objek utama yang menarik untuk diagnostik makmal adalah kelas Ig M, G dan A. Dengan tahap kepekatannya, anda dapat menentukan tahap penyakit dan mengetahui penyakit berjangkit apa yang seseorang alami dalam hidupnya. Contohnya, anda boleh memeriksa sama ada terdapat sejarah cacar air atau rubella. Doktor, untuk mengetahui sama ada jenis AT atau AH tertentu terdapat di dalam badan pesakit atau kepekatan hormon apa pun, tidak perlu menetapkan beberapa pemeriksaan makmal - cukup untuk menulis rujukan untuk ELISA.

Intipati teknik

Uji imunosorben yang berkaitan dengan enzim untuk parasit dan mikroorganisma lain - perosak kesihatan tubuh memungkinkan bukan sahaja untuk membuktikan adanya patogen, tetapi juga memberitahu tentang jumlahnya dalam plasma darah pesakit. Oleh itu, kajian sedemikian memungkinkan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif mikroorganisma patogen yang terdapat dalam serum..

Tahap kepekatan patogen secara signifikan mempengaruhi perkembangan jangkitan dan kadar pemulihan, oleh itu penilaian kualitatif dianggap tidak kurang penting daripada penilaian kuantitatif. Dia diberikan jauh dari peranan terakhir dalam rawatan kanak-kanak dan orang dewasa. Tetapi bagaimana ELISA mampu mengenali pelbagai mikroorganisma yang parasit tubuh manusia dan haiwan, menyebabkan bahaya dan mengurangkan kualiti hidup??

Metodologi kajian didasarkan pada beberapa pilihan (langsung dan tidak langsung - kompetitif dan tidak kompetitif) untuk melaksanakan tugas yang diberikan, masing-masing dirancang untuk tujuan tertentu. Pendekatan ini memungkinkan untuk mencari sasaran, dan dalam waktu sesingkat mungkin untuk mengenal pasti penyebab patologi tertentu. Untuk mengesan Ig dari kategori kelas yang berlainan, plat 96 sumur (panel polistirena) digunakan, dan protein rekombinan yang diserap terletak di telaga. Mereka memainkan peranan antigen, dan pada peringkat awal berada dalam fasa pepejal.

Ketika memasuki sumur dengan plasma darah, antigen atau antibodi mengenal pasti objek yang berkaitan dengan orientasinya, dan membentuk kompleks (AG - AT). Pembentukan ini diperbaiki oleh sebatian enzim (konjugat), yang kemudian akan menampakkan dirinya sebagai pewarnaan sumur yang berubah. ELISA dihasilkan pada sistem ujian khusus yang dihasilkan di makmal khusus dan dilengkapi dengan set reagen yang lengkap.

Analisis ini dapat dilakukan pada mesin basuh - mesin cuci dan pembacaan spektrofotometer, tetapi ia memerlukan tenaga kerja manual. Sudah tentu, pembantu makmal beberapa kali lebih mudah dan pantas untuk melakukan semua manipulasi pada peranti automatik sepenuhnya. Semasa menggunakannya, kakitangan makmal dibebaskan dari sejumlah besar aktiviti monoton - mencuci, menanam dan lain-lain rutin, tetapi tidak semua institusi perubatan mampu membeli peralatan yang mahal

Tafsiran bahan penyelidikan secara eksklusif adalah kecekapan pakar diagnosis makmal - hanya dia yang dapat diberitahu hasilnya mengenai spesifik dan kehalusan perjalanan penyakit ini. Dalam kes ini, doktor mesti mengambil kira kemungkinan mendapat jawapan positif palsu atau negatif positif..

Penyahkodan bahan

Hasil imunoassay enzim berkualiti tinggi mestilah kesimpulan yang jelas - mikroorganisma yang diinginkan dijumpai atau tidak dalam sampel darah ini. Analisis kuantitatif akan menunjukkan tahap kepekatan dan dapat dinyatakan dalam dua cara - berdasarkan nilai dalam angka atau dengan bilangan tanda "+".

Petunjuk yang dianalisis

Semasa penyelidikan, kajian yang teliti terhadap imunoglobulin utama yang terlibat dalam tindak balas imun dilakukan, seperti:

  • IgM - pengesanan kelas ini bermaksud perkembangan bentuk akut penyakit berjangkit. Hasil negatif untuk mencari IgM boleh menjadi bukti ketiadaan patogen yang diinginkan, dan peralihan penyakit ke arah kronik.
  • IgA - penentuan kelas ini dalam ketiadaan IgM dalam kebanyakan kes, isyarat bentuk kronik atau pendam perkembangan penyakit berjangkit.
  • IgM dan IgA (kehadiran serentak) - hasil positif untuk kedua-dua jenis menunjukkan puncak bentuk patologi akut.
  • IgG - kehadirannya menunjukkan perubahan penyakit menjadi bentuk kronik atau dalam pemulihan dan pembentukan imuniti kepada agen yang ditentukan.

Kemunculan dan pengumpulan kelas IS tertentu berlaku pada tahap masa yang berbeza. Jadi, sebagai contoh, IgM muncul pertama, kira-kira 5 hari selepas patogen menyerang. IG kekal dalam darah selama kira-kira 5-6 minggu dan kemudian secara beransur-ansur hilang. Pada masa ini, mereka tersedia untuk ditentukan oleh ELISA. Kira-kira 3-4 minggu selepas bermulanya penyakit, IgG muncul, yang kemudiannya dapat bertahan selama beberapa bulan. Tetapi dalam analisis itu tidak selalu dijumpai.

IgA terbentuk dalam darah dalam jangka masa 2-4 minggu, sementara 20% daripadanya terkandung dalam serum, dan 80% dalam rembesan membran mukus. Sebagai peraturan, imunoglobulin ini hilang dalam 2-9 minggu, yang menunjukkan pemusnahan patogen dan pemulihan pesakit. Sekiranya ELISA masih menunjukkan kehadiran IgA, maka ini menandakan peralihan proses ke bentuk kronik..

Pilihan analisis

Bergantung pada data yang diperoleh, jawapan ELISA dapat dikeluarkan dalam bentuk berupa tabel dengan daftar lengkap semua AT dan AG dan petunjuk reaksi positif atau negatif. Dalam situasi tertentu, nilai kuantitatif akan ditunjukkan - hasil positif, positif, lemah positif atau negatif. Pilihan kedua menunjukkan jumlah antibodi yang terdapat dalam sampel darah yang dikaji.

Sebagai tambahan kepada nilai di atas, parameter kuantitatif lain disiasat dalam proses ELISA - indeks ketersediaan AT, dikira sebagai peratusan. Ini menunjukkan berapa lama penyakit ini berlanjutan - iaitu, semakin tinggi penunjuknya, semakin banyak masa patologi berkembang.

Kaedah ELISA alternatif

Uji imunisasi enzim adalah diagnosis yang cukup terkenal dan biasa. Mungkin ada yang tidak pernah mendengarnya, tetapi ada versi lain dari kajian ini, bahkan kurang diketahui oleh sebilangan besar orang, di mana sampel tidak diambil darah. Teknik ini disebut analisis tinja untuk darah ghaib, dan dalam banyak kes, ini memungkinkan anda untuk mengelakkan prosedur tambahan yang melelahkan, yang juga disertai dengan sensasi yang tidak menyenangkan..

Ujian ELISA untuk darah ghaib (molekul hemoglobin) memungkinkan untuk mengesan pendarahan sistem pencernaan, walaupun tidak signifikan, tanda-tanda di mana najis pesakit, seperti yang mereka katakan, tidak dapat dijumpai dengan mata kasar. Ujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim pada tinja manusia dalam masa yang singkat dapat menunjukkan ulser peptik, poliposis, divertikulosis, tumor yang tidak disertai dengan gejala tertentu pada peringkat awal.

Setakat ini, beribu-ribu jenis sistem ujian immunoassay enzim telah dibuat, yang memberi peluang untuk mencari AT dan AG senarai besar patologi. Oleh itu, analisis ini digunakan di hampir semua cabang perubatan, untuk kategori umur apa pun. Keburukan yang mutlak membolehkan anda menggunakannya sepanjang kehamilan dan untuk diagnosis pesakit yang lemah.

Analisis ELISA: apa itu? mengapa ia diperlukan? kebaikan dan keburukan kaedah

Analisis ELISA - apa itu? Nama penuh kaedah diagnostik ini dipanggil ujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim, dan berdasarkan penentuan dalam darah periferi antibodi dari pelbagai kelas, atau imunoglobulin, yang dihasilkan oleh tubuh manusia..

Dalam praktik doktor, analisis ELISA mengambil tempat yang sangat penting apabila perlu untuk mendiagnosis patologi berjangkit. Analisis ini menunjukkan bukan hanya kehadiran penyakit berjangkit, tetapi juga tahap proses patologi. Juga, tidak hanya berkaitan dengan patogen, kaedah ELISA ditunjukkan untuk digunakan: ia digunakan untuk mendiagnosis keadaan alergi. Ujian ini membolehkan anda mengenal pasti masalah dalam sistem kekebalan tubuh, dalam banyak penyakit sistem hematopoietik, autoimun dan gangguan lain.

Mengapa IFA diperlukan?

Semua penyelidik cenderung untuk mempercayai bahawa nama "antibodi" terlalu disayangkan. Namun, ia mencerminkan satu ciri penting imunoglobulin: mereka dapat mengikat dan meneutralkan bahan berbahaya, mendekati mereka seperti "kunci" ke "kunci". Jumlah antibodi dalam darah tidak hanya mencerminkan kemampuan umum tubuh untuk melawan jangkitan, tetapi juga kemampuan untuk membentuk kompleks imun yang beredar, yang dapat terjadi pada pelbagai penyakit autoimun, misalnya, dengan rheumatoid arthritis atau ankylosing spondylitis..

Kompleks antibodi dengan antigen (faktor berbahaya berjangkit) adalah hasil tindak balas badan terhadap pengenalan "orang luar". Oleh itu, sistem imun belajar mengenalinya, dengan bantuan limfosit, ia melatih sel-sel imunokompeten, dan mereka dapat menghasilkan antibodi yang sangat spesifik. Jadi, antibodi terhadap virus Epstein disusun secara berbeza daripada antibodi terhadap virus hepatitis C, atau E. coli, dan anti-HAV, atau antibodi terhadap virus hepatitis A - berbeza daripada autoantibodi ke tisu tulang rawan. Kekhususan dan kepatuhan imunoglobulin yang tinggi terhadap agen berjangkit inilah yang menjadikan penyelidikan makmal tersebut sebagai ujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim sangat berharga..

Setelah hubungan antibodi dan antigen yang kuat ke dalam satu kompleks (antigen-antibodi), faktor berbahaya kehilangan keupayaannya untuk merosakkan tisu badan, dan kemudian kompleks ini dinetralkan atau dihilangkan oleh fagositosis oleh neutrofil, dan, "dicerna", meninggalkan badan.

Ujian darah ELISA dapat menunjukkan faktor patogenik tertentu yang dihadapi oleh tubuh kita, pada tahap apa proses interaksi antara tubuh dan jangkitan. Selepas kajian itu, doktor dapat membuat prognosis dengan tahap keyakinan yang tinggi, menetapkan jenis rawatan tertentu, dan dalam beberapa kes bahkan dapat menentukan jangka hayat pesakit, terutama dengan jangkitan virus kronik, misalnya, dengan hepatitis C virus.

Tetapi dalam beberapa kes, sama sekali tidak ada agen berjangkit di dalam tubuh, dan antibodi "secara tidak sengaja" menyerang organ dan tisu mereka sendiri, kerana sel yang tidak kompeten menerima maklumat palsu. Penyakit seperti itu disebut autoimun, dan enzim immunoassay juga membantu mengenali patologi kronik ini, dan membantu dalam diagnosis.

Lebih banyak mengenai imunoglobulin

Secara keseluruhan, tubuh manusia menghasilkan 5 kelas antibodi yang diketahui, yang ditetapkan Ig (yang bermaksud imunoglobulin), yang tergolong dalam kelas A, M, G, E, dan D. Kesemuanya sangat penting dalam menafsirkan hasil analisis ELISA. Sudah tentu, terdapat lebih banyak kompleks, dan tidak semuanya masih terbuka. Tetapi dalam diagnosis pelbagai penyakit, tiga jenis antibodi pertama sangat berharga. Ujian darah untuk ELISA menggunakan sebanyak mungkin maklumat: saat antibodi muncul di dalam darah, perubahan kepekatannya bergantung pada masa, tempoh hilangnya, serta jenis antibodi spesifik.

Oleh itu, peserta dalam proses infeksi akut primer adalah imunoglobulin kelas M, yang selalu menunjukkan fasa akut, walaupun dalam keadaan penyakit ini dihapuskan secara klinikal. Contoh yang tipikal adalah bentuk anikterik hepatitis B virus akut atau C. Imunisasi imunisasi untuk hepatitis akan menunjukkan bahawa seseorang mempunyai hepatitis akut, dan gejala seperti sakit di hipokondrium, mulut kering, sakit sendi dan gejala tidak spesifik lain menjadi mudah difahami.

Selepas beberapa minggu, antibodi ini dijumpai dalam kepekatan yang semakin hilang, menghasilkan imunoglobulin kelas G. Mereka ditentukan dalam darah selama berbulan-bulan, dan bahkan bertahun-tahun, dan menunjukkan pemulihan, dan kemudian ia dapat kekal seumur hidup, membentuk imuniti yang kuat. Ini menunjukkan perlindungan yang kuat terhadap antigen patogen. Jadi, antibodi kelas ini menjadikan seseorang kebal terhadap kes anthrax dan wabak berulang. Tetapi ada kalanya antibodi ini tidak mencegah kesannya yang berbahaya apabila terdapat antigen. Dalam kes ini, kita dapat membincangkan peningkatan aktiviti proses kronik..

Bagi IgE, ia memiliki aplikasi dalam diagnosis berbagai pencerobohan parasit dan keadaan alergi, dan IgD melakukan fungsi tambahan: ujian imunosorben berkait enzim memungkinkan penggunaannya dalam diagnosis kompleks asma bronkial dan keadaan autoimun. Sudah tentu, menguraikan analisis ELISA jauh lebih rumit, dan pakar - pakar imunologi dapat memberitahu lebih banyak lagi. Apakah petunjuk bahawa pesakit boleh memohon secara bebas ke makmal untuk melakukan penyelidikan?

Petunjuk untuk analisis

Pertama sekali, anda perlu memahami bahawa tidak ada analisis seperti itu - "hanya darah untuk ELISA". Terdapat analisis untuk hepatitis, ia berlaku - untuk ureaplasma, atau untuk sifilis. Oleh itu, menderma darah untuk ELISA hanya dapat disasarkan, dengan "memerintahkan" pencarian jangkitan yang diinginkan. Sangat tidak dapat difahami mengapa menderma darah dari vena, tidak tahu apa yang harus dicari. Inilah sebabnya mengapa enzim immunoassay adalah alat kuat yang penting dalam carian diagnostik. Hanya seorang doktor yang dapat menetapkan analisis ini, kerana dia sengaja mencari jangkitan yang ditandai dengan gejala ini. Orang biasa tentu saja boleh memesan 150 ujian darah dengan kaedah ELISA untuk "semua jangkitan", tetapi ini akan menjadi pendekatan yang tidak masuk akal dan mahal untuk diagnosis, mengambil ujian untuk semuanya.

Pelantikan ujian yang paling dituntut untuk penyakit dan keadaan berikut:

Pelbagai jangkitan mikroba dan virus, gejala penyakit berjangkit - ruam, demam, penyakit kuning, kelenjar getah bening, sindrom cirit-birit, disyaki penyakit kelamin.

Teknik ELISA membantu dalam penentuan ureaplasma dan mycoplasma, sifilis dan klamidia, tuberkulosis dan jangkitan sitomegalovirus, herpes, hepatitis virus dan virus Epstein-Barr. Pada masa ini, kira-kira 500 jangkitan berbeza dapat disahkan menggunakan enzim immunoassay.,

Sekiranya anda mengesyaki pencerobohan helminthik, dan adanya gejala seperti alergi, eosinofilia dalam darah, pruritus, dispepsia dan penurunan berat badan,

Baca lebih lanjut mengenai jenis penyelidikan ini dalam artikel "Ujian darah untuk cacing dan parasit: kaedah penyelidikan, ELISA, kepada siapa dan bagaimana untuk menderma?".

Semasa mengesan alergen yang menyebabkan angioedema, urtikaria, sesak nafas dan serangan asma.

Dalam kes ini, Ig E tertentu dikesan, dan terdapat keseluruhan panel alergi yang akan membantu menentukan alergen - cumi-cumi atau udang, makanan kering untuk ikan yang mengandungi daphnia, debu rumah dengan tepat. Dengan demam, kaedah ini membolehkan anda mencari dengan tepat bijirin, pokok renek atau pokok yang menyebabkan bersin musim bunga dan lakrimasi.,

  • Kaedah ini ditunjukkan untuk penyakit autoimun yang disyaki, yang dirawat oleh pakar rheumatologi,
  • Sekiranya pertumbuhan dan aktiviti tumor disyaki,
  • Dalam diagnostik kompleks keadaan imunodefisiensi dan jangkitan HIV,
  • Untuk penyakit darah dan dalam pemindahan, untuk penilaian imuniti yang komprehensif, misalnya, sebelum pemindahan hati atau ginjal.

Sekarang kami tahu mengapa anda perlu menderma darah untuk ELISA. Ketahui bagaimana kajian ini dijalankan.

Bagaimana analisis dilakukan?

Bahan klasik adalah darah vena pesakit. Tetapi jika perlu, anda boleh memeriksa pelbagai jenis cecair dan tisu: lendir, air liur, rembesan serviks, cecair serebrospinal, badan mata vitreous, kandungan tali pusat dan cairan ketuban. Penting untuk diingat bahawa mengambil pelbagai ubat, aktiviti fizikal yang berlebihan, penyalahgunaan alkohol dapat memutarbelitkan keputusan ujian..

Terdapat beberapa kaedah yang memungkinkan analisis ini. Kaedah yang paling biasa digunakan di makmal klinikal adalah kaedah fotometrik. Dalam kes ini, bahan yang ditandai dengan cat digunakan, setelah tindak balasnya, dan penandaan kompleks antigen-antibodi, warnanya berubah. Akibatnya, ketumpatan optik larutan juga berubah, dan perubahan ini berkadar langsung dengan kepekatan antibodi yang dikesan. Spektrofotometer makmal berjaya digunakan untuk mengukur penyimpangan ini.

Juga, untuk ELISA, kaedah fluorometrik digunakan, yang berdasarkan pendarfluor. Di sini juga, intensiti bahan pendarfluor yang telah menetap pada sampel yang dikaji dikira..

Akhirnya, analisis imunologi menggunakan kaedah elektrokimia untuk menentukan aktiviti enzim, yang merupakan label khusus untuk antigen dan antibodi. Enzim immunoassay sendiri selalunya melibatkan penggunaan enzim seperti alkali fosfatase, lobak peroksidase dan galactosidase. Enzim ini mampu mengikat antibodi atau antigen dan menandakannya kerana aktiviti mereka.

Kekurangan kaedah dan kebaikannya

"Kelebihan" yang jelas termasuk kos analisis demokratik, kemungkinan penggunaan penyaringannya dalam kumpulan besar populasi, misalnya, ketika memeriksa wanita hamil untuk HIV. Kaedah enzim immunoassay cukup spesifik dan boleh digunakan untuk mengawal kualiti rawatan untuk banyak penyakit. Penting agar analisis dibuat dengan cepat, dan mudah dan selamat bagi pesakit..

Namun, terdapat banyak perangkap. Jadi, jika imunoglobulin tidak dikesan, maka ini tidak bermaksud 100% ketiadaan penyakit ini. Memang, dengan latar belakang kekurangan imuniti, tubuh mungkin tidak "mempunyai kekuatan" untuk mensintesis antibodi. Sekiranya pesakit mengalami kegagalan hati yang teruk, maka hati tidak dapat mensintesis protein - blok penyusun antibodi. Dalam kes ini, hasilnya disebut seronegatif, dan pengesahan jangkitan diperlukan dengan kaedah penyelidikan langsung dan paling maju - PCR, atau reaksi berantai polimerase. Tidak seperti ujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim, kaedah ini tidak menunjukkan tindak balas badan terhadap proses berjangkit (yang mungkin cacat, atau tidak ada sama sekali), dengan PCR, bahan keturunan ditentukan secara langsung, atau patogen itu sendiri berada.

Kaedah enzim immunoassay dapat memberikan kesalahan terhadap latar belakang banyak penyakit kronik, dengan latar belakang terapi imunosupresif. Dalam helminthologi dan parasitologi, ada undang-undang: hanya pengesanan parasit, atau telurnya, adalah cara yang benar-benar dipercayai untuk membuat diagnosis. ELISA dapat memberikan kaedah positif silang dan palsu, bertindak balas terhadap banyak kejadian normal dalam kehidupan pesakit.

Sebagai kesimpulan, mesti dinyatakan bahawa ujian imunosorben yang berkaitan dengan enzim adalah kaedah diagnosis makmal yang kuat tetapi boleh membantu banyak penyakit. Walau bagaimanapun, diagnosis harus berdasarkan banyak faktor: keluhan dan anamnesis pesakit, data pemeriksaan, dan kaedah diagnostik tambahan dan instrumental lain.

Apa itu ujian darah ELISA dan mengapa penting untuk diagnosis

Apa itu ujian darah ELISA

Ini adalah kajian makmal yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi spesifik (faktor pelindung darah protein) terhadap antigen tertentu (agen patogen). Antara antibodi, imunoglobulin sangat penting, yang boleh wujud dalam bentuk imunokompleks.

Imunoglobulin dihasilkan sebagai akibat reaksi neurohumoral kompleks imuniti manusia, yang timbul sebagai tindak balas terhadap pengenalan antigen asing. Untuk setiap jenis agen patogen, antibodi spesifiknya sendiri dihasilkan. Mereka bertindak dengan "mengikat" antigen atau mikroorganisma patologi, membentuk sebatian kompleks "antigen-antibodi" dengan peneutralan berikutnya, lisis enzimatik, reaksi fagositosis dan perkumuhan dari badan.

Harap diperhatikan: dengan adanya kompleks tertentu dengan kaedah ELISA, jenis patogen atau bahan berbahaya yang tersedia untuk pesakit ditentukan..

Anda boleh mengetahui prinsip asas fungsi imuniti manusia dengan menonton tinjauan video ini:

Imunoassay jenis sandwic

Gambar: 2. Perwakilan skema imunoassay jenis "sandwic". ATp - antibodi sokongan, antibodi pengesan ATd, antigen AG, label M yang terikat secara kovalen ke antibodi pengesan, substrat P - di mana antibodi sokongan diserap.

Varian immunoassay ini (Gambar 2) menggunakan sepasang antibodi yang khusus untuk epitop jarak jauh dari antigen yang dikaji.

I. Penyerapan sokongan antibodi

Di dalam sumur plat 96 telaga untuk immunoassay, antibodi substrat diserap 1-2 μg per telaga dalam 100 μl garam buffer fosfat (PBS). Pengeraman dilakukan selama 30 minit pada suhu bilik dan gegaran pada pengocok plat mendatar. Pencucian (2 kali ganda) molekul antigen yang tidak terikat dilakukan dengan buffer fosfat-garam yang mengandungi 0.1% Tween-20 (PBST).

II. Menyekat

Untuk menyekat tapak pengikat yang tidak spesifik, sumur piring diisi dengan PBST dan diinkubasi selama 10-15 minit pada suhu bilik.

III. Pengeraman antigen

Di dalam sumur piring dengan antibodi yang diserap sebelumnya, tambahkan 50 μl larutan ujian atau pencairan antigen standard. Pengenceran antigen harus disediakan dengan PBST kerana Tween-20 mengurangkan pengikatan molekul protein yang tidak spesifik antara satu sama lain dan ke permukaan plat. Kedua-dua larutan ujian dan pencairan antigen standard diterapkan secara berpasangan (atau dalam 3 ulangan), menggunakan dua (tiga) telaga untuk setiap pencairan protein. Pengeraman dilakukan pada suhu bilik selama 30 minit dengan pengadukan berterusan. Pencucian dilakukan dengan larutan PBST sebanyak 3 kali.

IV. Inkubasi dengan antibodi yang berkaitan dengan enzim

Di dalam sumur pinggan, tambahkan 100 μl larutan antibodi khusus yang disambungkan dengan label enzim. Kepekatan optimum antibodi konjugasi biasanya ditunjukkan oleh pengilang (biasanya kepekatan 2-4 μg / ml digunakan). Pengeraman dengan antibodi berlabel enzim dilakukan selama 30 minit pada suhu bilik dan goncang pada pengocok plat mendatar. Pencucian dilakukan dengan PBST 5-6 kali.

V. Menjalankan reaksi enzimatik, disertai dengan penampilan produk berwarna

Tambahkan 100 μl larutan substrat ke dalam sumur dan inkubasi selama 10 minit pada suhu bilik dan kacau berterusan.

Vi. Menghentikan tindak balas enzimatik

Sebelum mengukur ketumpatan optik, tindak balas warna dihentikan dengan 0,5 M H2SO4. Setelah pengeraman, 50 μl larutan asid sulfurik 0.5 M ditambahkan ke telaga dengan larutan kerja OPD. Selepas itu, anda boleh mula mengukur ketumpatan optik.

Vii. Pengukuran ketumpatan optik

Ketumpatan optik larutan produk berwarna diukur pada λ = 490 nm menggunakan spektrofotometer plat.

versi cetak

Apa itu imunoglobulin

5 kelas utama imunoglobulin telah ditemui dan dikaji - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. peranan selebihnya belum diperjelaskan sepenuhnya dan ia berada pada tahap penyelidikan saintifik.

Harap maklum: yang paling penting dalam perubatan praktikal adalah imunoglobulin kelas - A, M dan G. Nilai informatif definisi didasarkan pada selang waktu yang berbeza dari penampilan, maksimum dan hilangnya.

Mari pertimbangkan isu ini dengan lebih terperinci..

Tugas utama imunoglobulin A (IgA) adalah fungsi perlindungan membran mukus saluran pernafasan, saluran gastrousus dan sistem kencing. Dengan permulaan penyakit yang teruk, mustahil untuk mengenal pasti mereka. Kompleks pelindung ini muncul hanya dari 2 minggu permulaan penyakit, kadang-kadang kemudian. Sebilangan besar imunoglobulin A tertumpu pada tisu mukosa. Lebih kurang 80%. Selebihnya antibodi beredar di dalam darah. Fungsi utamanya adalah untuk meneutralkan dan memusnahkan mikroorganisma. Setelah manifestasi akut penyakit ini reda, jumlah imunoglobulin ini mulai berkurang dan hilang sepenuhnya sehingga 8 minggu setelah bermulanya penyakit. Sekiranya IgA dikesan di kemudian hari, maka ini menunjukkan penyesuaian proses.

Penanda utama dan pertama fasa akut patologi berkembang adalah imunoglobulin kelas M (IgM). Mereka dijumpai pada hari ke-5 dari permulaan malaise. Kehadiran mereka dalam darah dapat ditentukan selama kira-kira 6 minggu. Kemudian mereka mula pudar dengan cepat.

Tindak balas imun yang tersisa dicirikan oleh kehadiran imunoglobulin kelas G (IgG) dalam darah. Kemunculan faktor-faktor ini dalam darah dikesan kira-kira sebulan setelah bermulanya penyakit. Di masa depan, mereka dapat ditentukan selama berbulan-bulan, bertahun-tahun dan bahkan sepanjang hidup, melakukan fungsi perlindungan terhadap kembalinya (kambuh) penyakit ini, dan dalam beberapa kes menjadikannya mustahil untuk perkembangan patologi sekunder. Sekiranya jumlah imunoglobulin G mulai meningkat lagi, maka disyaki jangkitan semula. Kesimpulan yang serupa dapat dibuat dengan melakukan dua hingga tiga ujian yang dibuat dengan selang waktu 2 minggu..

Immunoglobulin E (IgE) digunakan dalam amalan parasitologi.

Immunoglobulin D (IgD) terletak pada limfosit B dan didapati dalam kepekatan rendah pada orang yang sihat. Setelah 10 tahun hidup, ia mencapai nilai maksimum. Jumlah imunoglobulin D meningkat semasa kehamilan, pada pesakit dengan penyakit tisu penghubung sistemik, asma bronkial, penyakit yang disebabkan oleh keadaan imunodefisiensi.

Kontraindikasi

Tidak ada kontraindikasi kardinal untuk enzim immunoassay yang dikenal pasti. Kadang-kadang semasa kehamilan, apabila pesakit mengalami perubahan hormon darah secara berterusan, mungkin perlu dilakukan analisis beberapa kali untuk hasil yang lebih dipercayai. Kaedah diagnostik tidak digalakkan untuk digunakan selepas:

  • campur tangan pembedahan;
  • hemolisis (pemusnahan sel darah merah);
  • pemindahan darah;
  • mengambil tusukan atau biopsi bahan biologi.

Petunjuk untuk pelantikan enzim immunoassay

Penentuan antibodi terhadap kehadiran mikroba patogen yang menyebabkan:

  • sifilis;
  • trichomoniasis;
  • ureaplasmosis dan mycoplasmosis.

Terdapat peningkatan jumlah imunoglobulin dan dengan pencerobohan helminthik.

Diagnostik dijalankan untuk mengesan:

  • penyakit herpes;
  • kumpulan hepatitis virus;
  • Virus Epstein-Barr;
  • sitomegalovirus.

Dengan bantuan ELISA, anda dapat menentukan kehadiran antibodi kepada 600 jenis alergen, mengesan keadaan imunodefisiensi, melakukan pemeriksaan komprehensif sebelum pembedahan transplantasi, melakukan analisis komprehensif untuk keberkesanan rawatan.

ELISA adalah kaedah tambahan untuk mengesan sel barah.

Latihan

Prinsip ujian darah jenis ini didasarkan pada pembentukan antibodi spesifik dalam tubuh manusia ketika antigen memasukinya, iaitu agen asing yang menyebabkan perkembangan penyakit tertentu. Sebagai hasil interaksi mereka, kompleks "antigen - antibodi" terbentuk, yang menjadi penelitian dalam pelaksanaan enzim immunoassay.

Dalam hal ini, agar tidak mempengaruhi kompleks ini dan, dengan demikian, kebolehpercayaan hasil yang diperoleh, analisis darah dan bahan biologi lain untuk ELISA memerlukan beberapa persiapan..

Darah disumbangkan pada waktu perut kosong, juga 14 hari sebelum pemeriksaan yang dimaksudkan, perawatan khusus ditangguhkan dan penggunaan ubat antibakteria, antivirus dihentikan.

Darah untuk ELISA didermakan dari urat. Segera sebelum pengambilan sampel darah, aktiviti fizikal harus dibatasi, begitu juga dengan merokok dan minum minuman beralkohol.

Bagaimana ELISA darah dilakukan?


Untuk enzim immunoassay, dalam kebanyakan kes, darah pesakit digunakan, kadang-kadang tisu badan vitreous, cecair saluran tulang belakang, cairan ketuban diambil.

Darah diambil melalui jarum suntikan ke dalam jarum suntik dari urat kubital. Kajian ini dilakukan semasa perut kosong. Perlu diingat bahawa pengambilan ubat tertentu boleh mempengaruhi hasil ujian. Sebelum menderma darah, anda mesti menahan diri dari merokok, minum alkohol. Penggunaan dadah boleh memutarbelitkan hasil.

Sekiranya terdapat nilai negatif imunoglobulin IgM, IgG, IgA, kita boleh membincangkan tentang ketiadaan penyakit atau fasa awalnya, dan hasilnya dengan minus adalah mungkin dengan pemulihan sepenuhnya setelah sejumlah masa.

Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG menunjukkan dirinya secara positif, maka kemungkinan kita akan membicarakan imuniti yang terbentuk setelah penyakit berjangkit, atau setelah vaksinasi.


Sekiranya IgM titer tinggi dengan nilai negatif IgG, IgA, dapat disimpulkan bahawa terdapat penyakit berjangkit akut.

Nilai positif serentak hasil imunoglobulin - IgA, IgM, IgG adalah ciri khas untuk fasa akut kambuh penyakit kronik yang ada.

Untuk jangkitan kronik pada fasa proses yang hilang (pengampunan), ELISA menunjukkan nilai negatif imunoglobulin M (IgM), sementara hasil imunoglobulin G (IgG) dan A (IgA) akan positif.

Kit reagen

Kit untuk immunoassay enzim dihasilkan oleh pengeluar yang berbeza dalam pelbagai konfigurasi. Ia diiktiraf di Rusia. Pengilang ini menghasilkan set reagen untuk kajian dengan kaedah ELISA hampir semua jangkitan yang biasa berlaku di garis lintang kita yang dapat dianalisis dengan cara ini. Sebagai tambahan kepada reagen itu sendiri, alat ini termasuk bahan tambahan, yang memastikan keselamatan, kemudahan dan kecepatan analisis. Di samping itu, bahan kimia diwarnai dengan warna yang berbeza, yang mengurangkan kemungkinan kesalahan dalam pemilihan reagen oleh pembantu makmal..

Kit kimia dan biologi berbeza dalam ketersediaan relatif, yang secara langsung mempengaruhi pengedaran dan ketersediaan enzim immunoassay untuk populasi.

Kelebihan kaedah immunoassay enzim

Kelebihan utama kaedah ELISA adalah:

  • kos analisis yang rendah;
  • kekhususan diagnostik, ketepatan;
  • kawalan dinamik (analisis berulang untuk menentukan keberkesanan rawatan dan peringkat penyakit);
  • kemungkinan melakukan pemeriksaan massa di pusat jangkitan;
  • kepantasan memperoleh hasilnya;
  • kemudahan analisis relatif;
  • kemungkinan menggunakan teknologi maklumat dalam pemprosesan;
  • keselamatan dan kesakitan bagi pesakit.

Semasa melantik

Kaedah ELISA dianggap sebagai salah satu kaedah diagnostik yang paling tepat, kebolehpercayaannya melebihi 90%. Analisis ini digunakan untuk mengenal pasti pelbagai penyakit serius dan keadaan berbahaya..

Patologi apa yang dapat dikenal pasti:

  • hepatitis virus;
  • HIV;
  • jangkitan sitomegalovirus;
  • patologi herpetic;
  • mononukleosis;
  • toksoplasmosis;
  • rubella, campak;
  • beberapa jenis parasitosis;
  • patologi yang disebabkan oleh Helicobacter pylori;
  • penyakit onkologi;
  • reaksi alahan;
  • gangguan hormon;
  • masalah dalam kerja sistem pembiakan;
  • patologi autoimun;
  • gangguan perkembangan, kecacatan janin.

Uji imunisasi enzim semasa kehamilan membolehkan anda menilai risiko mengembangkan patologi buah pinggang, jantung, saluran darah tertentu.

Diagnosis dilakukan untuk memantau tahap antibodi yang boleh menyebabkan gangguan neurologi yang serius pada anak.

Ujian darah immunoassay dalam parasitologi


Kemungkinan menggunakan ELISA dalam diagnosis penyakit parasit ditentukan oleh imunoglobulin E (IgE) spesifik, yang cenderung meningkat pada kumpulan penyakit ini. Sebagai tambahan, imunoglobulin E adalah penanda reaksi atopik yang berkaitan dengan proses alahan. Dalam darah, ia dijumpai dalam jumlah kecil. Penyetempatan utamanya adalah membran mukus, basofil, dan marcophage. Fungsi utama kompleks protein ini adalah untuk melindungi selaput lendir badan. Tetapi pada masa yang sama, dia adalah peserta dalam tindak balas imun yang diarahkan terhadap parasit. Eosinofil dan makrofag "menguruskan" pengaktifan IgE. Ini adalah fakta penting dalam membandingkan data analisis ketika menetapkan diagnosis penyakit..

ELISA digunakan untuk mengesan:

  • helminths bulat (ascaris, pinworms);
  • bentuk opisthorchiasis akut dan kronik;
  • trichinosis;
  • kehadiran lamblia (sebagai analisis tambahan);
  • bentuk leishmaniasis;
  • amoebiasis;
  • kandungan toksoplasma;

Penting: imunoglobulin dihasilkan di dalam badan sebagai antibodi terhadap antigen tertentu. Oleh itu, walaupun dengan kekhususan tertinggi analisis, kesilapan ketepatan tidak dikecualikan. Dengan penyakit parasit, peratusan kebarangkalian adalah sekitar 90%.

Sebagai kesimpulan, perlu diperhatikan bahawa imunologi moden terus berkembang, mencari kaedah diagnosis dan rawatan penyakit baru..

Stepanenko Vladimir, pakar bedah

67 jumlah hari ini

(54 suara, rata-rata: 4.17 daripada 5)

Catatan yang serupa
Ujian darah lipid
Ujian darah untuk kreatinin: norma, penyahkodan, cara menderma

Sedikit mengenai peranan pelindung protein dalam tubuh manusia

Selepas jangkitan, antibodi manusia mengubah kepekatannya dalam darah, bergantung pada tahap penyakit. Ini adalah kajian mengenai kuantiti dan kualiti antibodi yang membantu menentukan sama ada fasa ini akut atau kronik dan seberapa berkesan badan mengatasi flora asing..

Analisis ELISA berkesan dalam kajian gangguan hormon, definisi kanser dan gangguan imun. Ia dapat mengesan pada tahap awal penyakit serius seperti hepatitis B dan sifilis, jangkitan HIV, serta sejumlah virus yang tidak menampakkan diri dengan cara apa pun, misalnya sitomegalovirus.

Kebaikan dan keburukan

Jenis diagnosis imunosorben yang berkaitan dengan enzim mempunyai beberapa kelebihan berbanding kaedah pemeriksaan lain:

  1. Sensitiviti tinggi (sehingga 90%)
  2. Harga kit diagnostik yang berpatutan.
  3. Kestabilan sambil menyimpan semua ramuan untuk ujian (lebih dari setahun);
  4. Kemungkinan mengesan jangkitan pada peringkat pertama.
  5. Kemudahan dan kecekapan penyelidikan.
  6. Kesesuaian untuk tinjauan massa.
  7. Penyatuan.
  8. Kemungkinan menggunakan bahan minimum yang didiagnosis.
  9. Kemudahan dalam mengesan dinamika perjalanan patologi yang bersifat berjangkit.
  10. Ketersediaan (hari ini enzim immunoassay dilakukan di semua hospital dan klinik)
  11. Automasi tahap tindak balas.

Antara kekurangan kajian adalah:

  • Tidak mengenal pasti agen penyebab penyakit itu sendiri, tetapi tindak balas imun badan terhadap penembusan patogen ke dalamnya.
  • Kemungkinan mendapat hasil positif palsu (negatif negatif) kerana mengambil ubat tertentu, kekurangan teknikal, gangguan metabolisme, kehadiran beberapa penyakit kronik.

Kemungkinan teknik

Bidang aplikasi ujian darah untuk ELISA cukup luas - pada masa ini mustahil untuk membayangkan betapa rumitnya pencarian penyebab banyak penyakit. Penyelidikan seperti ini kini digunakan di hampir semua bidang perubatan, bahkan dalam bidang onkologi. Walaupun sulit untuk dimengerti yang tidak berpengetahuan, dalam beberapa kasus, setelah melakukannya, adalah mungkin untuk menyelamatkan nyawa pesakit, setelah menemukan tumor pada tahap awal..

Penting! ELISA - ujian darah yang menunjukkan penanda ciri beberapa proses ganas, yang membolehkan anda mengesan penyakit pada tahap itu ketika berada di luar kawalan kaedah lain.

Di pusat diagnostik moden, pemeriksaan makmal tidak hanya ditunjukkan oleh penanda tumor - mereka juga dilengkapi dengan panel panel yang mengagumkan untuk menjalankan diagnosis ini. Dengan pertolongan mereka, banyak keadaan patologi dapat ditentukan, seperti kelainan hormon dan proses berjangkit dari pelbagai asal..

Di samping itu, melakukan dan menyahkod ujian darah ELISA akan memungkinkan untuk mengesan kesan ubat-ubatan pada tubuh orang yang sakit dan juga haiwan. Yang terakhir digunakan secara meluas di klinik veterinar, membantu menjaga kesihatan haiwan peliharaan atau pencari nafkah kita, menyediakan bekalan daging, produk tenusu dan telur yang tidak tergantikan dalam diet..

Oleh itu, akibat mengambil hanya beberapa mililiter darah vena dan diagnosisnya menggunakan kaedah ELISA, doktor, setelah menerangkan bahan penyelidikan, dapat menentukan:

  • keadaan hormon, termasuk bahan aktif biologi gonad dan kelenjar tiroid, serta kelenjar adrenal;
  • kehadiran jangkitan bakteria dan virus (hepatitis B dan C, sifilis, herpes, klamidia, tuberkulosis, myco- dan ureaplasmosis, HIV, TORCH) dan penyakit lain seperti ini;
  • tanda-tanda aktiviti penting patogen proses patologi, yang berakhir dalam pemulihan dan melewati tahap pembentukan antibodi (tindak balas imun).

Kompleks semacam itu jauh lebih mudah dikenali dan dihilangkan oleh sel-sel imun. Kesan sisa dalam bentuk antibodi dalam banyak kes terkandung dalam darah seumur hidup, yang secara praktikal mengurangkan risiko jangkitan semula menjadi sifar.

Uji imunosorben yang berkaitan dengan enzim untuk parasit dan mikroorganisma lain - perosak kesihatan tubuh memungkinkan bukan sahaja untuk membuktikan adanya patogen, tetapi juga memberitahu tentang jumlahnya dalam plasma darah pesakit. Oleh itu, kajian sedemikian memungkinkan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif mikroorganisma patogen yang terdapat dalam serum..

Tahap kepekatan patogen secara signifikan mempengaruhi perkembangan jangkitan dan kadar pemulihan, oleh itu penilaian kualitatif dianggap tidak kurang penting daripada penilaian kuantitatif. Dia diberikan jauh dari peranan terakhir dalam rawatan kanak-kanak dan orang dewasa. Tetapi bagaimana ELISA mampu mengenali pelbagai mikroorganisma yang parasit tubuh manusia dan haiwan, menyebabkan bahaya dan mengurangkan kualiti hidup??

Metodologi kajian didasarkan pada beberapa pilihan (langsung dan tidak langsung - kompetitif dan tidak kompetitif) untuk melaksanakan tugas yang diberikan, masing-masing dirancang untuk tujuan tertentu. Pendekatan ini memungkinkan pencarian yang disasarkan, dan secepat mungkin untuk mengenal pasti penyebab patologi tertentu..

Ketika memasuki sumur dengan plasma darah, antigen atau antibodi mengenal pasti objek yang berkaitan dengan orientasinya, dan membentuk kompleks (AG - AT). Pembentukan ini diperbaiki oleh sebatian enzim (konjugat), yang kemudian akan menampakkan dirinya sebagai pewarnaan sumur yang berubah. ELISA dihasilkan pada sistem ujian khusus yang dihasilkan di makmal khusus dan dilengkapi dengan set reagen yang lengkap.

Analisis ini dapat dilakukan pada mesin basuh - mesin cuci dan pembacaan spektrofotometer, tetapi ia memerlukan tenaga kerja manual. Sudah tentu, pembantu makmal beberapa kali lebih mudah dan pantas untuk melakukan semua manipulasi pada peranti automatik sepenuhnya. Semasa menggunakannya, kakitangan makmal dibebaskan dari sejumlah besar aktiviti monoton - mencuci, menanam dan lain-lain rutin, tetapi tidak semua institusi perubatan mampu membeli peralatan yang mahal

Oleh itu, banyak hospital dan institusi diagnostik terus menjalankan ELISA dengan cara lama - pada alat semiautomatik..

Tafsiran bahan penyelidikan secara eksklusif adalah kecekapan pakar diagnosis makmal - hanya dia yang dapat diberitahu hasilnya mengenai spesifik dan kehalusan perjalanan penyakit ini. Dalam kes ini, doktor mesti mengambil kira kemungkinan mendapat jawapan positif palsu atau negatif positif..

Hasil analisis ELISA didasarkan pada memperoleh reaksi kimia terhadap enzim yang berfungsi sebagai tanda pengenalan khas untuk mengenali antibodi. Oleh itu, antibodi mula berinteraksi dengan beberapa antigen semasa tindak balas imunokimia. Semua ini memberi alasan untuk menegaskan bahawa keputusan palsu ketika menderma darah untuk ELISA adalah minimum..

Kajian ini membolehkan anda menentukan bilangan sel imun, sifatnya, serta kehadiran antibodi yang diperlukan

Hasil positif dipertimbangkan apabila warna larutan dikesan. Warna memberi isyarat bahawa antigen berinteraksi dengan antibodi. Sekiranya tiada perkara seperti ini berlaku, hasilnya adalah negatif..

Terdapat beberapa teknik dan kaedah immunoassay enzim: langsung dan tidak langsung, berdaya saing dan menyekat.

Di jantung pemeriksaan darah (bahan biologi lain) pada ELISA adalah algoritma yang terdiri dalam pelaksanaan dua reaksi - imun dan enzimatik.

Semasa yang pertama, agen patologi mengikat unsur pelindung sel bahan biologi yang diambil untuk penyelidikan. Kompleks imun antigen-antibodi terbentuk. Ia kelihatan seperti ini. Antigen terdapat di permukaan semua sel.

BUTIRAN: Darah pada transkrip klamidia

Apabila sel-sel asing memasuki tubuh, mereka ditangkap oleh sel-sel imun (di mana permukaannya terdapat antibodi), yang membandingkan data antigen dari permukaan sel yang baru tiba dengan maklumat yang tersimpan dalam "memori" mereka sendiri. Sekiranya data tidak sesuai, fungsi pelindung tubuh dihidupkan, yang terdiri daripada pembentukan kompleks imun.

Selepas itu, reaksi enzimatik dilakukan, yang memvisualisasikan hasil reaksi sebelumnya. Prinsipnya didasarkan pada transformasi bahan dari satu ke yang lain. Untuk setiap jenis bahan ELISA yang terbentuk semasa reaksi imun, ada enzim tertentu, rawatan yang digunakan untuk menentukan kepekatan agen asing (mengikut intensitas pewarnaan larutan).

ELISA - ujian imunosorben berkaitan enzim: transkrip

Dihantar oleh: Parazitolog dalam Diagnostik 16 Februari 2019

Kaedah diagnostik (ELISA) bersifat informatif dan tidak terlalu mahal, oleh itu banyak makmal menawarkan kaedah ini kepada pelanggan mereka (ujian imunosorben berkaitan enzim). Kajian ini dilakukan pada waktu perut kosong, darah untuk analisis diambil dari urat kubital pesakit. Sebaiknya jangan merokok atau minum alkohol sebelum ELISA.

Apa itu ujian darah ELISA

Di antara kaedah analisis darah, yang memungkinkan untuk menilai kemampuan tubuh untuk menentang penyakit berjangkit dan menunjukkan fasa penyakit, analisis imunosorben berkaitan enzim (ELISA) menempati tempat yang penting. Kajian ini memungkinkan untuk menilai secara komprehensif aktiviti fungsi pelindung darah dan mengenal pasti keadaan imunodefisiensi dalam patologi berjangkit, serta penyakit darah, proses autoimun, masalah hormon.

Ini adalah kajian makmal yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi spesifik (faktor pelindung darah protein) terhadap antigen tertentu (agen patogen). Antara antibodi, imunoglobulin sangat penting, yang boleh wujud dalam bentuk imunokompleks.

Imunoglobulin dihasilkan sebagai akibat reaksi neurohumoral kompleks imuniti manusia, yang timbul sebagai tindak balas terhadap pengenalan antigen asing. Untuk setiap jenis agen patogen, antibodi spesifiknya sendiri dihasilkan. Mereka bertindak dengan "mengikat" antigen atau mikroorganisma patologi, membentuk sebatian kompleks "antigen-antibodi" dengan peneutralan berikutnya, lisis enzimatik, reaksi fagositosis dan penarikan dari badan. Dengan adanya kompleks tertentu kaedah ELISA menentukan jenis patogen atau bahan berbahaya yang ada.

Perlu diingat bahawa setelah rawatan selesai, antibodi dapat tinggal di dalam tubuh kita untuk waktu yang sangat lama, walaupun setelah jangkitan itu meninggalkan tubuh kita, iaitu. apa yang disebut "parut serologi" kekal. Contohnya, terdapat ribuan bintang di langit malam. Banyak bintang-bintang ini telah lama mati, tetapi cahaya mereka telah bersinar hingga kini, selama berabad-abad. Sebenarnya, kita hanya melihat jejak bintang. Terdapat cahaya, tetapi bintang-bintang sudah lama hilang.

Tetapi jika tidak ada cahaya, ini tidak bermaksud bahawa bintang itu tidak ada di sana. Ia sama dengan antibodi. Kehadiran mereka tidak menjamin kehadiran agen jangkitan yang diinginkan di dalam badan. Ketiadaan antibodi tidak bermaksud tidak ada jangkitan. Sekiranya hasil analisis oleh ELISA positif, ini bermakna anda perlu mencari jangkitan dengan kaedah yang lebih spesifik dan mahal - PCR, kultur bakteriologi. Hasil positif yang salah adalah mungkin jika beberapa mikroba mempunyai struktur antigenik yang serupa, maka antibodi "serupa" akan dihasilkan untuk mikroba yang berbeza.

Apa itu imunoglobulin

5 kelas utama imunoglobulin telah ditemui dan dikaji - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. peranan selebihnya belum diperjelaskan sepenuhnya dan ia berada pada tahap penyelidikan saintifik.

Tugas utama imunoglobulin A (IgA) adalah fungsi perlindungan membran mukus saluran pernafasan, saluran gastrousus dan sistem kencing. Dengan permulaan penyakit yang teruk, mustahil untuk mengenal pasti mereka. Kompleks pelindung ini muncul hanya dari 2 minggu permulaan penyakit, kadang-kadang kemudian. Sebilangan besar imunoglobulin A tertumpu pada tisu mukosa. Lebih kurang 80%. Selebihnya antibodi beredar di dalam darah.

Penanda utama dan pertama fasa akut patologi berkembang adalah imunoglobulin kelas M (IgM). Mereka dijumpai pada hari ke-5 dari permulaan malaise. Kehadiran mereka dalam darah dapat ditentukan selama kira-kira 6 minggu. Kemudian mereka mula pudar dengan cepat.

Tindak balas imun yang tersisa dicirikan oleh kehadiran imunoglobulin kelas G (IgG) dalam darah. Kemunculan faktor-faktor ini dalam darah dikesan kira-kira sebulan setelah bermulanya penyakit. Di masa depan, mereka dapat ditentukan selama berbulan-bulan, bertahun-tahun dan bahkan sepanjang hayat, melakukan fungsi perlindungan terhadap kembalinya (kambuh) penyakit ini, dan dalam beberapa kes menjadikannya mustahil bagi perkembangan patologi sekunder.

Sekiranya jumlah imunoglobulin G mulai meningkat lagi, maka disyaki jangkitan semula. Kesimpulan yang serupa dapat dibuat dengan melakukan dua hingga tiga ujian yang dibuat dengan selang waktu 2 minggu..

Immunoglobulin E (IgE) digunakan dalam amalan parasitologi.Imunoglobulin D (IgD) terletak pada B-limfosit dan didapati dalam kepekatan rendah pada orang yang sihat. Setelah 10 tahun hidup, ia mencapai nilai maksimum. Jumlah imunoglobulin D meningkat semasa kehamilan, pada pesakit dengan penyakit tisu penghubung sistemik, asma bronkial, penyakit yang disebabkan oleh keadaan imunodefisiensi.

Bagaimana ELISA darah dilakukan?

Untuk enzim immunoassay, dalam kebanyakan kes, darah pesakit digunakan, kadang-kadang tisu badan vitreous, cecair saluran tulang belakang, cairan ketuban diambil.

Sekiranya terdapat nilai negatif imunoglobulin IgM, IgG, IgA, kita boleh membincangkan tentang ketiadaan penyakit atau fasa awalnya, dan hasilnya dengan minus adalah mungkin dengan pemulihan sepenuhnya setelah sejumlah masa.

Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG menunjukkan dirinya secara positif, maka kemungkinan kita akan membicarakan imuniti yang terbentuk setelah penyakit berjangkit, atau setelah vaksinasi.

Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG menunjukkan dirinya secara positif, maka kemungkinan kita akan membicarakan imuniti yang terbentuk setelah penyakit berjangkit, atau setelah vaksinasi

Sekiranya IgM titer tinggi dengan nilai negatif IgG, IgA, dapat disimpulkan bahawa terdapat penyakit berjangkit akut.

Nilai positif serentak hasil imunoglobulin - IgA, IgM, IgG adalah ciri khas untuk fasa akut kambuh penyakit kronik yang ada.

Untuk jangkitan kronik pada fasa proses yang hilang (pengampunan), ELISA menunjukkan nilai negatif imunoglobulin M (IgM), sementara hasil imunoglobulin G (IgG) dan A (IgA) akan positif.

Immunoassay untuk parasit oleh ELISA

ELISA adalah singkatan untuk ujian imunosorben berkaitan enzim untuk parasit. Ini menunjukkan ujian perubatan sistem imun seseorang. Ujian ini berdasarkan kemampuan antibodi untuk mengubah warnanya. Kaedah diagnostik ini mempunyai banyak ciri positif. Sebagai contoh, dia dapat mengesan pelbagai jenis penyakit yang disebabkan oleh jangkitan. Ia paling berkesan dalam kes penyakit yang disebabkan oleh organisma parasit..

Apa yang diberikan teknologi yang dipersembahkan: penentuan kehadiran helminths dalam darah; mencari patogen lain di dalam badan; anda boleh mengetahui sebab-sebab kemerosotan kesihatan anda; rawatan juga berdasarkan analisis yang diperoleh dengan cara ini; anda boleh memantau keadaan sistem imun anda.

Ciri lain yang baik adalah kemampuan untuk mengesan penanda barah, tanpa mengira asal usulnya, tetapi tentu saja bergantung pada kehadirannya di dalam badan. Ujian ini juga sesuai untuk menerangkan keadaan sistem pembiakan manusia. Kehadiran protein, hormon dan peptida tertentu memungkinkan untuk menilai potensi pasangan dalam hal mengandung anak, dan juga anggaran kualiti janin masa depan.

Ujian darah untuk Giardia adalah amalan yang cukup popular di kalangan doktor moden. Di samping itu, kaedah penyelidikan ini adalah alat yang sangat baik untuk analisis bioperubatan dan statistik kuantitatif dari segi antigen tertentu..

Bagaimana kaedah ELISA digunakan?

Adalah menjadi kesalahan besar untuk mengelirukan kaedah ELISA dengan kaedah menyiasat dan mengkaji tinja seterusnya. Yang terakhir dilakukan dengan menggunakan metode pada tingkat mikroskopik, ketika sampel tinja yang diberikan oleh pasien diambil, atau diambil dari calon pasien secara langsung di institusi perubatan. Dalam sampel, mereka cuba mengesan pencerobohan helminthik dan komponen lain, satu atau lain cara yang berkaitan dengan aktiviti penting parasit. Bukan hanya organisma parasit mikroskopik yang dipelajari, tetapi juga sisa-sisa, telur dan larva mereka.

Benar, ini adalah kes yang lebih kompleks, jadi kualiti analisis sedemikian sangat bergantung pada pekerja makmal yang melakukan ujian. Ciri-ciri teknologi dan perbezaannya dari penyelidikan makmal lama:

  • sekarang, bukannya sampel najis, darah digunakan untuk menentukan kehadiran helminths;
  • kajian sampel dijalankan di makmal dengan cepat, pada keesokan harinya anda dapat maklumat lengkap;
  • kos penyelidikan makmal adalah murah, kerana teologi sangat sederhana;
  • ujian darah untuk helminths memberikan ketepatan yang tinggi.

Kesesuaian dan kebolehlaksanaan keputusan ujian berkadar langsung dengan kelayakan pegawai perubatan, peralatan teknikal makmal, dan juga ketiadaan kecuaian atau kelalaian di kalangan doktor. Namun, walaupun pembantu makmal yang paling prihatin dan bertanggungjawab akan mengalami kesulitan besar jika parasit terdapat di dalam tubuh dengan populasi minimum, atau jika klac dilakukan segera pada saat ujian..

Analisis imunologi darah oleh ELISA

Hanya sedikit orang yang mengetahui tentang ujian darah dari sudut pandang sistem imunologi manusia, kerana ujian ini tidak begitu biasa. Sebagai peraturan, ujian darah seperti itu memberikan maklumat mengenai virus imunodefisiensi dalam tubuh manusia dan tidak dikenali, kerana ia dilakukan atas permintaan pesakit.

Pada asasnya, untuk analisis ELISA, bahan biologi yang dikaji adalah darah, bagaimanapun, cecair serebrospinal, kandungan badan vitreous, cecair amniotik, dll..

Untuk pengambilan sampel, darah yang diambil dari vena pada perut kosong digunakan, dari mana serum diperoleh untuk penyelidikan dengan sentrifugasi. Di samping itu, kajian serum darah dapat mendedahkan sejumlah penyakit kelamin (sifilis, herpes, klamidia), serta semua jenis hepatitis, campak, rubela, beguk dan toksoplasmosis..

Pada asasnya, untuk analisis ELISA, bahan biologi yang dikaji adalah darah, bagaimanapun, cecair serebrospinal, kandungan badan vitreous, cairan ketuban, dll..

Immunoglobulin adalah molekul imun yang dapat mengikat dan meneutralkan kebanyakan agen dan toksin berjangkit di dalam badan. Dalam kes ini, ciri imunoglobulin yang paling penting adalah kekhususannya, iaitu kemampuan untuk mengikat antigen tertentu. Ini adalah sifat inilah yang digunakan untuk melakukan ujian darah untuk imunoglobulin..

Terdapat lima jenis imunoglobulin, tetapi yang paling banyak dikaji adalah imunoglobulin A, M, dan G. Immunoglobulin M dan G aktif dalam darah. Immunoglobulin A adalah sejenis penghalang pada permukaan membran mukus, kerana terdapat dalam jumlah besar.

Ujian darah imunologi membolehkan anda menentukan jenis imunoglobulin, berkat ini, ELISA bukan sahaja memungkinkan untuk mendiagnosis penyakit, tetapi juga menentukan tahap ini dan mengesan dinamika penyakit:

  • dalam 2 minggu pertama penyakit ini, hanya imunoglobulin A yang dijumpai;
  • dari minggu ke-2 hingga ke-3 penyakit ini, imunoglobulin A dan M dijumpai dalam darah;
  • CC3 selama 4 minggu, ujian darah untuk imunoglobulin ditentukan oleh ketiga-tiga jenis;
  • semasa pemulihan, imunoglobulin M hilang dalam darah, dan jumlah A dan G menurun 2 hingga 4 kali;
  • sekiranya terdapat proses kronik, imunoglobulin G semestinya terdapat dalam darah, imunoglobulin M tidak hadir, imunoglobulin A boleh hadir atau tidak ada.

Skop ujian darah imunologi oleh ELISA

  • Diagnostik penyakit virus: hepatitis, herpes, virus Epstein-Barr, sitomegalovirus, dll.
  • jangkitan kelamin: klamidia, gonorea, Trichomonas, mycoplasma, ureaplasma;
  • sifilis; endokrinologi (penentuan tahap hormon);
  • penanda tumor (diagnostik penyakit onkologi); imunologi (diagnostik imunodefisiensi);
  • alergi (diagnosis dan rawatan alahan).

Ujian darah serologi adalah ujian darah makmal yang digunakan untuk mendiagnosis penyakit berjangkit dan menentukan tahap proses menular. Tindak balas serologi berdasarkan interaksi antibodi dan antigen.

Penentuan antigen digunakan untuk menentukan genus dan spesies mikroorganisma. Kaedah penyelidikan ini digunakan dalam urologi dan venereologi. Darah untuk ujian darah serologi diambil pada waktu pagi dengan perut kosong dari urat.

Petunjuk untuk temu janji dan penyakit yang dikesan dengan kaedah ELISA

Biomaterial utama untuk ELISA adalah serum darah: di makmal, sampel darah diambil dari pesakit dari urat, dari mana unsur-unsur terbentuk yang menyulitkan analisis kemudiannya dikeluarkan. Dalam beberapa kes lain, analisis menggunakan cecair serebrospinal, cairan ketuban, smear membran mukus, dll..

Untuk mengelakkan penyelewengan pada hasilnya, disarankan untuk menderma darah ketika perut kosong, dan dua minggu sebelum kajian (jika tujuannya adalah untuk mendiagnosis penyakit berjangkit kronik, laten), adalah perlu untuk berhenti mengambil antibiotik dan ubat antivirus. Mustahil untuk merangkumi senarai penuh petunjuk untuk ELISA..

Matlamat analisis yang paling biasa adalah:

  • diagnostik penyakit berjangkit akut dan kronik: IgM dan IgG hingga hepatitis A, B, C, E virus, serta antigen hepatitis B dan C; IgG hingga HIV; Ig M dan IgG kepada jangkitan sitomegalovirus; Virus Ig M dan IgG hingga Epstein-Barr; Ig M dan IgG kepada jangkitan herpes; Ig M dan IgG toxoplasmosis;
  • Ig M dan IgG untuk campak, rubela, salmonellosis, disentri, ensefalitis bawaan kutu dan penyakit lain; IgG untuk penyakit parasit; Ig M dan IgG kepada jangkitan kelamin; Jangkitan IgG ke Helicobacter pylori. Penilaian umum penunjuk imuniti manusia dan penanda beberapa penyakit autoimun. Pengenalpastian penanda onkologi (faktor nekrosis tumor, antigen spesifik prostat, antigen kanser-embrio dan lain-lain). Penentuan kandungan hormon dalam serum darah (progesteron, prolaktin, testosteron, hormon perangsang tiroid dan lain-lain).

Kelebihan kaedah ELISA

Kelebihan ELISA yang tidak dapat dipertikaikan adalah kepekaan dan kekhususan kaedah yang tinggi. Sensitiviti adalah keupayaan untuk mengenali bahan sasaran, walaupun kepekatannya dalam sampel rendah. Kekhususan, sebaliknya, menunjukkan ketepatan diagnosis: jika hasilnya positif, itu bermaksud bahawa antibodi atau antigen yang diasumsikan telah dijumpai, dan bukan beberapa yang lain.

ELISA telah banyak menggantikan "standard emas" mikrobiologi - kaedah diagnostik bakteriologi, di mana, untuk mengenal pasti patogen, ia diperlukan untuk mengasingkannya dari badan, dan kemudian mengembangkan kultur pada medium nutrien dalam tabung uji selama beberapa hari.

Sepanjang masa, ketika analisis dilakukan, para doktor terpaksa merawat pasien secara "membabi buta", menebak tentang asal-usul mikroorganisma oleh gejala-gejala penyakit ini. Penentuan IgM menggunakan ELISA membolehkan anda membuat diagnosis tepat pada hari-hari pertama penyakit ini.

Tahap pengilangan enzim immunoassay yang tinggi meminimumkan pengaruh faktor manusia, yang mengurangkan kemungkinan kesalahan. Sebilangan besar kit ujian dan reagen ELISA yang digunakan di makmal moden dihasilkan dalam persekitaran industri, yang menjamin hasil yang tepat.

Kelemahan kaedah ELISA

Malangnya, untuk menjalankan ELISA, anda perlu mengetahui apa sebenarnya yang harus dicari: teknik analisis menunjukkan bahawa doktor mempunyai andaian terlebih dahulu mengenai sifat penyakit ini. Oleh itu, tidak masuk akal untuk menetapkan ujian sedemikian dengan harapan "meneka" diagnosis secara tidak sengaja.

Sekiranya mendiagnosis penyakit berjangkit, enzim immunoassay tidak dapat menemui patogen dan menentukan sifat spesifiknya: ia hanya menunjukkan adanya antibodi dalam darah pesakit, secara tidak langsung menunjukkan adanya mikroorganisma asing di dalam tubuh manusia. ELISA adalah kaedah yang sangat tepat, tetapi tidak murah, jadi anda perlu menggunakannya dengan bijak, dan doktor yang berkelayakan harus menafsirkan hasil.

Kemungkinan hasil ELISA

Bergantung pada isi analisis, formulir mungkin berisi data dalam bentuk tabel yang menyenaraikan semua antibodi atau antigen yang ditandai dengan reaksi negatif atau positif, atau nilai kuantitatif hasilnya (negatif, lemah positif, positif atau tajam positif) akan ditunjukkan.

Hari ini, beribu-ribu jenis sistem ujian ELISA dihasilkan, yang memungkinkan pengesanan antibodi dan antigen spesifik dalam pelbagai jenis patologi. Oleh itu, analisis ini digunakan di hampir semua industri perubatan. Diagnosis yang dibuat dengan bantuan ELISA adalah jaminan pelantikan terapi yang mencukupi dan rawatan penyakit yang berkesan..

Sekiranya anda mempunyai reagen yang diperlukan dan organisasi makmal yang baik, anda akan menerima keputusan ujian dalam 1-2 hari selepas pengumpulan darah. Dalam beberapa kes, jika tindak balas kecemasan diperlukan, tempoh ini dapat dikurangkan menjadi 2-3 jam.

Hasil ELISA berkualiti tinggi akan menjadi keputusan yang tidak jelas: bahan yang dikehendaki sama ada dijumpai atau tidak dijumpai dalam sampel. Sekiranya kita berbicara mengenai analisis kuantitatif, maka konsentrasi dapat dinyatakan sebagai nilai berangka atau sejumlah tanda "+" (dari satu hingga beberapa).